Microscópios – Curso Preparatório Concurso Público: Biomédico | Bioquímico | Análises Clínicas

Conteúdo
Espectrofotômetros e Leitores de ELISA
Prof. Dr. Victor Proença
Espectrofotômetro
 Mede e compara a quantidade de luz (energia radiante) absorvida por uma determinada solução.
 Quanto maior a absorbância, maior a concentração da substância = Lei de Lambert-Beer
 Usos: bioquímica, imunologia etc.

Partes do Espectrofotômetro
 Fonte de Luz: lâmpada de deutério (UV) e lâmpada de tungstênio (visível)
 Monocromador: transforma a luz em monocromática
 Cubeta: recipiente da amostra (quartzo, vidro e acrílico)
 Detector: dispositivo que detecta a fração de luz que passou pela amostra

Equação de Lambert-Beer
 A = εbc
 A = absorvância (medida pelo espectrofotômetro);
 ε = constante molar de absorção (característica de cada espécie química);
 b = profundidade de penetração da luz (dependente do comprimento de onda da luz utilizada e do tipo de cubeta);
 c = concentração da solução (expressa em mol/L ou g/L, dependendo do tipo de solução).

Absorvância
 Absorvância (A) = medida da quantidade de luz que é absorvida pela solução.
 Relação entre a intensidade da luz que entra na solução (Io) e a intensidade da luz que sai da solução (I) (A = log10(Io/I)).
 Diretamente proporcional à concentração da solução e à constante molar de absorção da espécie química presente na solução.

Transmitância
 Transmitância (T) = medida da quantidade de luz que é transmitida pela solução.
 Relação entre a intensidade da luz que sai da solução (I) e a intensidade da luz que entra na solução (Io) (T = I/Io).
 Inversamente proporcional à concentração da solução e à constante molar de absorção da espécie química presente na solução.

Branco
 Branco é importante para que as medidas de absorbância das amostras possam ser comparadas ao valor de referência (absorbância zero)
 Permite determinar a concentração da substância absorvente presente na amostra.
 Solução de “branco= estabelece uma referência para a medida da absorbância.
 Branco não contém a substância que se deseja medir; é utilizada para estabelecer um valor
de referência para a medida de absorbância.
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